Transcript GPC柱子填装

Freestyle 培训手册
郭泰
上海磐和电子科技有限公司
Tel: 13918728051
Fax: 021-33581023
目录
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GPC.SPE原理介绍
 Freestyle仪器硬件介绍
 操作规程，日常维护及常见故障判
断处理
 工作站操作培训
关于GPC
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凝胶净化系统
从样品中除去大分子物质
提高分析结果的精确度
延长进样口和分析柱的使用寿命
经过GPC净化
未经过 GPC净化
GPC的应用

目前在对各类中药类样品、环境样品和食品样品中的农药
残留物分析时，一般样品的萃取物中含有大量的高分子物
质,比如色素、油脂、糖等，这些高分子聚集在GC的进样
口和分析柱上，造成色谱分离效率降低。因此，这类样品
必须进行有效的净化。

凝胶渗透色谱（GPC）作为样品净化的手段之一，已被证
明是一种使用最为方便的样品净化技术。这种净化技术在
国外已经得到较为广泛的应用,它已成为美国环保局
（EPA）,食品药物管理（FDA）,美国分析化学协会
（AOAC）及欧州(EN)法定方法 。
GPC 的原理
流
向
t
t
主要流出物
收集被分析物
先流出物
高分子量废弃物
Bio-Beads
SPE基本原理
SPE是一种吸附剂萃取，样品通过填充吸附剂的一次性萃取柱，分析物
和杂质被保留在柱上，然后分别用选择性溶剂去除杂质，洗脱出分析物，
从而达到分离的目的。
SPE的分离模式主要取决于填充剂的类型和溶剂的性质.
SPE也是一个柱色谱分离过程，分离机理、固定相和溶剂的选择等方面
与高效液相色谱（HPLC）有许多相似之处。
但是SPE柱的填料粒径（>40µm）要比HPLC填料（3~10µm）大。由
于短的柱床和大的粒径，SPE柱效比HPLC色谱柱低得多。因此，用
SPE只能分开保留性质有很大差别的化合物。
与HPLC的另一个差别是SPE柱是一次性使用
SPE法的优点
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简单、快速和简化了样品预处理操作步骤 ,缩
短了预处理时间。
处理过的样品易于贮藏、运输 ,便于实验室间
进行质控。
可选择不同类型的吸附剂和有机溶剂用以处理
各种不同类的有机污染物。
不出现乳化现象 ,提高了分离效率。
仅用少量的有机溶剂 ,降低了成本。
易于与其他仪器联用 ,实现自动化在线分析。
常见固相萃取小柱的构造
Freestyle Series重要组成部分
进样泵
高效冷凝柱
GPC柱
GPC进样针
SPE进样针
定量环
真空浓缩腔
GPC泵
SPE模块
Freestyle Series重要组成部分
溶剂切换十通阀
缓冲管
注射器
Freestyle Series重要组成部分
液相泵密封塞
Freestyle Series重要组成部
分
主机电源
浓缩系统电源
电源开关：关闭电源后，再打开中间要间隔1分钟。
Freestyle Series重要组成部分
低温恒温水槽
低温水槽： 提供冷凝塔的冷凝水，冷凝水温度2-6℃
Freestyle Series重要组成部分
GPC模块： GPC 凝胶净化柱（核心部件）
 500mmⅹ25mm glass column（国际农残标准柱）
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400mmⅹ10mm glass column（迷你柱）
700mmⅹ25mm glass column（EPA标准柱）
400mmⅹ20mm glass column（高效快速柱）
350mmⅹ25mm glass column（S19快速柱）
内置过滤系统、螺旋柱头以及五层刮片特殊设计，均可自
行填充，且自由更换溶剂体系
填料：Bio-Beads, Type S-X3,200-400
Freestyle Series重要组成部分
多样化、易操作样品/收集架
16ml样品架30位
4ml样品架60位
1ml样品架60位
100ml样品架30位
250ml样品架8位
1L样品架4位
250ml旋转蒸发架8位
500ml旋转蒸发架6位等多种规格
独有Unique随心换功能：不需要任何工具，用户可以自行更
换架并进行精确定位！
Freestyle Series重要组成部分
GPC模块： 紫外检测器（选配件）
可选配：
1、254或280nm固定波长紫外检测器
2、195—800nm可变波长紫外检测器
紫外检测器在前处理仪器中的作用：
1、验证柱效的一个辅助手段
2、针对某些对紫外有响应的样品进行方法研发时的辅助作用
FreeStyle 系统-主要组成部分
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电源开关：主机电源，浓缩系统电源，开关机时间间
隔1分钟以上。
进样针：GPC进样针，SPE进样针。
GPC柱子： 柱子规格，装填填料的克数，装填高度，
柱子带有金属保护外壳可重复使用。
注射器，多通阀：抽取清洗溶剂。
样品盘：规格，用于何种模式。
浓缩系统：浓缩腔采用水浴和加热片加热模式；可以
使用减压蒸馏和氮吹模式进行浓缩；清洗采用喷雾式，
使用很少的溶剂就可以清洗干净；激光定容，定容体
积从0.5-5ml。
冷凝系统：冷凝塔将浓缩后的气态溶剂冷凝到液态，
以保证对实验环境的保护。
低温水槽： 提供冷凝塔的冷凝水，冷凝水温度2-6C。
FreeStyle 系统-操作注意事项
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

先打开低温水槽制冷，在打开电源，再电源打开至少
1min后才可以打开工作站。
在进样针移动的过程中，不要碰到针，以免造成运行
样品的终止。
确认样品架的位置刻度和工作站的样品架位置一致。
运行样品前，确认溶剂瓶内的溶剂是否足够，废液瓶
内的空间是否足够。
仪器的维护：至少2周冲一次柱子。具体操作，开机自
检完成后，直接点击“start pump”，运行15-30min
后，点击“stop pump”，退出工作站，关闭电源。
上样样品的要求：样品体系必须和柱子的体系一致；
脱水；去除可见杂质；油脂的上样量控制在1g以下
（标准柱）。
FreeStyle 系统-操作注意事项
常见故障的判断和处理：

1.低压报警：由于泵头里有空气造成溶剂抽不上。

解决方案：打开液相泵的密封塞，在工作站上
将流速调制20ml/min，运行“start pump”，待有连
续溶剂流出，”stop”并关闭密封塞，将流速调回至
5ml/min。再次冲柱子，压力上升至正常值，问题解决。

2.高压报警：由于管路里有堵塞。

解决方案：将柱子倒过来用，反冲，如果压力
下降，可以继续使用；如果压力仍然偏高，建议更换
柱内过滤膜。同时也可将反压阀拆下来，用丙酮超声。

Freestyle系统-软件操作培训
1.
双击，打开工作站。
2. 点击“Init.”
进行自检。自检完成
后，会显示以下图示。
3.自检完成后，新建方法：选择相应模式的方法
（GPC，EVA，SPE，FLEX），进行方法编辑。
Freestyle系统-软件操作培训
4.调用已编辑好的方法
5.选择所用的样品盘。
6.编辑样品序列，将实际样品位置和工作站上样品位置相对应。
7.点击“start”，开始运行
8.序列运行完成后，点击
主机电源。
退出工作站，并关闭
9.客户自行操作，熟悉仪器及工作站的使用。
GPC方法
建立新方法
液相泵的压力范围
分段收集时间
流速
紫外检测器
流动相
进样速度
进样方式
标准模式充满定量环
定量转移（小于定量
环体积）
定量转移（大于定量
环体积一个小瓶）
定量转移（大于定量
环体积多个小瓶
废液瓶
GPC柱子
选择和参
数编辑
样品收集模
式选择
分段收集模式
online联机模式
收集瓶的选择
EVA 方法
SPE或GPC在线联机 建立新方法
样品部分转移到浓缩腔
样品全部转移到浓缩腔
样品加
入浓缩
腔
水浴温度
加热套温度
浓缩时体积
浓缩腔真空度
样品瓶选择
收集瓶选择
浓缩真空
度设定
浓缩
参数
设定
停止浓缩时体积
清洗溶剂体积
清洗溶剂选择
清洗次数
最大浓缩时间
清洗次数设定 清洗溶剂体积设定
定容体积设定
清洗溶剂选择
定容溶剂选择
每瓶分样
体积
浓缩
定容
参数
收集瓶设
定
样品瓶分瓶设定 样品瓶型号选择
清洗次数
第一次清洗体积
浓缩
清洗
参数
设定
清洗
溶剂
选择
清洗
溶剂
选择
清洗次数
第二次清洗体积
FLEX方法
方法名称
建立新方法
调用的方法名
称
调用的方法
的及参数
样品瓶规格及
数量
收集瓶规格及数量
SPE STEP-condition活化
清洗体积
重复次数
吸溶剂速度
注入溶剂速
度
吸取注入的
等待时间
该步后的
等待时间
使用溶剂
该步骤溶剂的
流出位置
该步
骤运
行时
间
SPE STEP-emptying放空
抽气体体积
重复次数
吸取注入
空气速度
吸取注入
等待时间
该步骤结
束后的等
待时间
该步
骤运
行时
间
SPE STEP-load上样
取样方式
样品瓶类型
取样体积
吸取样品
速度
样品上柱
速度
取样注入
间隔时间
该步骤结
束后等待
时间
样品收集位
置
SPE STEP-wash清洗
清洗体积
重复次数
吸取溶剂
速度
注入速度
吸取注入间
隔时间
该步骤结
束后的等
待时间
使用溶剂
该步骤溶剂的
流出位置
该步
骤运
行时
间
收集
瓶类
型及
数量
SPE STEP-dry吹干
吹干方式
空气吹干
空气体积
注入空气流
速
该步骤溶剂的
流出位置
该步
骤运
行时
间
SPE STEP-eluting洗脱
洗脱体积
重复次数
吸取溶剂
速度
注入速度
吸取注入间
隔时间
该步骤结
束后的等
待时间
使用溶剂
该步骤溶剂的
流出位置
该步
骤运
行时
间
收集
瓶类
型及
数量
选择样品架
选择方法
样品盘类型，必须
和实际放置的盘类
型一致，刻度一致
选择样品
盘类型
编辑序列
样品名称
运行模式
方法名称
GPC柱子填装
———— 填料的称取
1.
标准柱GPC10010（500*25mm），称取
50g填料（Bio-Beads SX3），加入200ml
环己烷乙酸乙酯溶剂（体积比1：1的混合溶
剂）或二氯甲烷
2.
迷你柱GPC20010(500*10mm)，10g填料，
100ml混合溶液
3.
高效快速柱GPC40010(500*10mm)，25g
填料，150ml混合溶液；
4.
EPA标准柱子GPC50010(500*10mm)，
70g填料，300ml混合溶液；
GPC柱子填装
————填料的浸泡

称取相应重量填料

加入适量环己烷、乙
酸乙酯混合溶剂（体
积比1：1）或二氯甲
烷

搅匀，用一次性橡胶
手套封口，放于避光
处浸泡12h以上再装填。
GPC柱子填装
1.装柱之前，将空柱长
塞向上的固定在铁架
台上，拔去长塞。短
塞处连接一小段管子。
2.将浸泡好的填料搅匀
后，从上端倒入柱内
————装填步骤
GPC柱子填装
————装填步骤
3. 待填料都倒入后，等待
柱内的溶剂尽可能的排
尽。注意不要让柱内干
了。
4. 将短塞处管子拆下，接
于长塞上，并用堵头将
短塞堵死。
GPC柱子的填装
————装填步骤
5.
将长塞塞回柱内，并下
压。同时注意将上端管
子内流出的溶剂接入烧
杯内
6.
将长塞压至填料固定位
置（不同型号柱子长度
不同：eg 标准柱为
32cm），上下误差
1cm。 将柱子接回仪
器，开泵冲洗。如果不
漏，柱子装填完毕