Transcript 01 LM SBIS GenUm10_11 CITOG 1

Citogenetica
La citogenetica e` lo studio dei fenomeni genetici attraverso l’analisi citologica dei
cromosomi al microscopio.
Ferguson-Smith
Lezione 1
Storia della citogenetica
1882 W.Flemminf: immagini di cromosomi
(cromatina)
1888 Waldeyer: termine “cromosoma”
1900 Riscoperta di Mendel. Sutton e Bovery:
teoria cromosomica dell’ereditatarieta’
1923 Painter: determinazione del sesso nell’uomo: XY
Storia della citogenetica
1950 Studi su sezioni di testicoli (48 cromosomi)
 Storia della citogenetica
1952 Soluzione ipotonica (T.C.Hsu) (48 cromosomi)
Storia della citogenetica
1955 Ford e Hamerton: colchicina
Storia della citogenetica
1956 Tjio JH and Levan A. The chromosome
number of man. Hereditas, 1956, 42:1-16.
 Storia della citogenetica
1959 Sindromi:
+21; X0; XXY
1960 Denver Conference:
-J. Lejeune: trisomy 21 and Down syndrome
-C. Ford: XXY karyotype and Klinefelter syndrome
-P. Jacobs: X0 karyotype and Turner syndrome
1960 P.Nowell: PHA per coltura linfociti
1960 Cromosoma Philadelphia
Storia della citogenetica
1966 Conferenza di Denver
1-3 gruppo A
4-5 gruppo B
X-6-12 gruppo C
13-15 gruppo D
19-20 gruppo F
16-18 gruppo E
Y-21-22 gruppo G
 Storia della citogenetica
1971 Quinacrine mustard:Q-banding (Caspersson)
1972
G-banding
con Giemsa
Storia della citogenetica
Storia della citogenetica
1992 FISH (Fluorescence In Situ Hybridization) (P.Lichter)
Dimensioni dei cromosomi
Triturus
cristatus
Homo
sapiens
Drosophila
melanogaster
30M
Muntiacus reevesi
Muntiacus muntjak
Muntjac dimensioni dei cromosomi
Costituenti del cromosoma
TELOMERO
NOR
COSTRIZIONE SECONDARIA
CENTROMERO (COSTRIZIONE
PRIMARIA)
TELOMERO
Telomeri
*COMPOSTI DA ETEROCROMATINA
* HANNO UNA SEQUENZA COMUNE
(in uomo TTAGGG)
 ESSENZIALI NELLA
STABILITA’ DEI CROMOSOMI
Centromero
Fibre del fuso
dominio centrale
DNA
satellite
dominio di
appaiamento
dominio del
cinetocore
C-bande
Lunghezza del
cromosoma
50.000:1
5 avvolgimenti
della doppia elica
sezione della
cromatina
fibra di 30nm con i
nucleosomi
strettamente
impacchettati
parte di una sezione di
cromosoma
sezione condensata
di un cromosoma
metafasico
cromosoma
metafasico
2nm
11nm
30nm
300nm
700nm
1400nm
Organizzazione del cromosoma I
spiralizati
doppia elica
di DNA
istoni
H2A
H2B
H3
H4
parzialmente
despiralizati
core
DNA
istone
H1
nucleosoma
struttura della cromatina
despiralizati
Organizzazione del cromosoma II
proteine DNA-binding
sequenza specifiche
nucleosoma
30
nm
Segmento di cromatina
Cromatina
La cromatina si distingue in:
* eucromatina
facoltativa
* eterocromatina
costitutiva
Eterocromatina
COSTITUTIVA
FACOLTATIVA
•DNA satellite
•Qualsiasi tipo di DNA
•C-bande positiva
•Solitamente C-bande negativa
•Sempre replicazione tardiva
•Replicazione tardiva
•Mai trascritta
•Non trascritta
•Assenza di crossing over
•Crossing over
•“Appiccicosa”e soggetta
ad appaiamento ectopico
•Nessun comportamento particolare
•Puo’ concorrere al
“silenziamento” dei geni
•Silenzia i geni sul crom X
e sugli autosomi
•Presente in tutti i tipi cellulari
•Limitata a specifiche linee cellulari
Allestimento di preparati per analisi citogenetica
Coltura cellulare
Sangue periferico
o tessuti
Processamento delle cellule
Preparazione vetrini
COLTURE CELLULARI
di tessuto
TIPI DI COLTURE
CELLULARI
di organo
di cellule
COLTURE CELLULARI
TIPI DI COLTURE
Primarie
Secondarie o stabilizzate
SI Inibizione da contatto
NO Inibizione da contatto
SI Senescenza
NO Senescenza
NO Trasformazioni spontanee
SI Trasformazioni spontanee
SI Cariotipo normale
NO Cariotipo normale
ALLESTIMENTO DELLE COLTURE
CAMERA GESTAZIONALE
ALLESTIMENTO DELLE COLTURE
CAMERA GESTAZIONALE E SACCO VITELLINO
ALLESTIMENTO DELLE COLTURE
PRELIEVO DI UN PICCOLO FRAMMENTO DI MEMBRANA
ALLESTIMENTO DELLE COLTURE
ELIMINAZIONE DEI VILLI
MEMBRANA PARZIALMENTE
PRIVA DEI VILLI
ALLESTIMENTO DELLE COLTURE
FRAMMENTAZIONE DI UN PICCOLO PEZZO DI CAMERA
ALLESTIMENTO DELLE COLTURE
PRELIEVO DI PARTE DELLA MEMBRANA
FRAMMENTATA
POSIZIONAMENTO DEI FRAMMENTI
IN UNA CAPSULA PETRI PICCOLA
ALLESTIMENTO DELLE COLTURE
DISTRIBUZIONE DEI FRAMMENTI NELLA
CAPSULA PETRI PICCOLA
FRAMMENTI DISTRIBUITI
UNIFORMEMENTE
ALLESTIMENTO DELLE COLTURE
ELIMINAZIONE DELLE BOLLE D’ARIA
POSIZIONAMENTO DEL
VETRINO ROTONDO
AGGIUNTA DEL TERRENO
Fiaschetta coltura cellulare
ALONE DI CRESCITA
FIBROBLASTI CRESCIUTI INTORNO AD UN
FRAMMENTO DI TESSUTO
ALONE DI CRESCITA
FIBROBLASTI CRESCIUTI INTORNO AD
UN FRAMMENTO DI TESSUTO
FIBROBLASTI
FIBROBLASTI
CELLULE ENDOTELIALI
CELLULE EPITELIALI
LINFOBLASTI